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轮状病毒肠炎患儿的两种检测方法比较
2013-03-14

徐亮, 李萍, 陈建芳, 卞新南

南京医科大学附属苏州医院 苏州市立医院, 江苏 苏州 215001

    

【摘要】目的:研究粪便中轮状病毒病原体的两种快速检测方法的比较。方法:荧光定量 RT-PCR 方法检测轮状病毒核酸, 与 WHO 推荐的轮状病毒检测方法酶联免疫测定平行检测, 对比评价。结果:荧光定量 RT-PCR 体系具有高度灵敏度和特异性, 与酶联免疫测定方法的检出率差异有统计学意义( 2= 42, P< 0. 01) 。结论:轮状病毒荧光定量 RT-PCR 体系优于酶联免疫测定方法, 可用于临床检测。对及时明确病因, 防止轮状病毒暴发、流行, 做好公共卫生工作具有重要意义。

 

主题词:肠炎/微生物学; 轮状病毒属/分离和提纯; 逆转录聚合酶链反应; 酶联免疫吸附测定

 

中图分类号:R516. 1    文献标识码: A    文章编号:1009-6647(2011) 24-5865-02

 

       每年轮状病毒感染致使约有60万婴幼儿死亡,且近80%发生于欠发达地区,所以腹泻婴幼儿轮状病毒的监测日益被临床所重视。本文使用一对轮状病毒(Rotavirus)特异性引物和一条特异性Taqman探针技术,实现荧光定量RT-PCR方法检测轮状病毒核酸,与WHO推荐的轮状病毒检测方法酶联免疫测定平行检测,对该体系的临床意义进行评价。

 

1 材料与方法

1.1 标本来源随机选取2009-10在我院儿科门诊就诊的腹泻患儿42例病例,其中男26例,女16例。42例患儿中<6月龄的有3例(7.1%),6月龄~2岁的有37例(88.1%),>2岁的有2例(4.8%)。以稀水样、蛋花汤样大便为入选标准。

1.2 方法采用酶联免疫吸附实验检测粪便标本中的轮状病毒抗原。同时采用荧光定量RT-PCR技术对轮状病毒核酸进行检测。全部标本为一人一份,样本储存于-20;避免反复冻融,运送采用加冰泡沫箱。均由一位实验人员完成并进行阴性、阳性对照监测。

1.3 统计学处理使用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。两组计数资料比较采用x平方 检验。

 

2 结果

2.1 荧光定量RT-PCR体系与EL ISA的检出率结果见表1。

 

表1两种检测方法间的检出率比较

检测方法 阳性 阴性
轮状病毒抗原 26 16
 轮状病毒核酸 32 10

两种检测方法的检出率比较,差异有统计学意义,x的平方=42,P<0 01。

 

2.2 腹泻患儿年龄构成以6月龄~2岁的患儿为主,占88 1%,不同年龄构成的轮状病毒感染患儿情况见表2。结果表明6月龄~2岁组腹泻患儿的轮状病毒检出率与其他年龄组比较差异有统计学意义(P<0.01)。

2.3 不同性别患儿轮状病毒检出率结果见表3。不同性别腹泻患儿中男性轮状病毒检出率高于女性,两组间两种不同检测方法比较差异均有统计学意义。提示男性患儿可能更易感染轮状病毒。国内一般报道男性RV检出率高于女性,这与我们的结果一致。

 

表2不同年龄组患儿轮状病毒检测结果 

年龄 总数(n) 抗原阳性(n) 检出率(%) 核酸阳性(n) 检出率(%)
<6月龄 3 3 33.3 1 33.3
6月龄~2岁 37 25 67.6 31 83.8
>2岁 2 0 0 0 0

 

表3不同性别患儿轮状病毒检测结果性别总数(n)抗原阳性(n)检出率(%)核酸阳性(n)

性别 总数(n) 抗原阳性(n) 检出率(%) 核酸阳性(n) 检出率(%)
26 20 73.1 23 84.6
16 6a 43.8 9b 62.5
注:a 2=6.53,P<0.05;b 2=5.67,P<0.05。

 

 

3 讨论

       小儿腹泻在我国常见病、多发病中排第二位。引起腹泻的病因有多种.其中轮状病毒是婴幼儿急性腹泻的主要病原。轮状病毒为双链RNA病毒,是婴幼儿腹泻的最主要原因,多发于秋冬季节;医学资料显示,轮状病毒感染性腹泻是婴幼儿急诊和死亡(除呼吸道感染之外)的第二位病因,我国每年大约有1000万婴幼儿患轮状病毒感染性胃肠炎,占婴幼儿总人数的1/4。高危人群主要为6月龄~3岁的婴幼儿。患儿发病初期表现为流涕、咳嗽、发热、咽部疼痛等感冒症状,大便每日数次,急性水样腹泻,且伴有呕吐、腹痛,容易被误诊为胃肠型感冒。若治疗不及时或治疗方法不正确,会导致患儿死于脱水及肺炎、中毒性心肌炎等严重并发症,更甚者还可合并脑炎、肺炎、肠出血、肠套叠或病毒性心肌炎而危及生命。因此,轮状病毒成为全世界医学界研究的焦点。

       本次研究标本采集主要在10月份,且以稀水样、蛋花汤样大便为入选标准,所以阳性检出率可能高于普通腹泻患儿的相关病原体调查。但仍有一定的阴性病例,除要考虑实验方法,技术外,应充分认识到很多类似病例并非轮状病毒感染,而是由其他病原体感染或是单纯受凉等物理因素引起。

       目前医院临床实验室胶体金法检测比较普遍,敏感度为95.2%,特异性为65.3%,而其假阳性率34.7%,漏诊率4 8%;一般进行的PA GE法可以辨别病毒感染的带型,但是敏感性较低,为64.4%,特异性95.8%,而其假阴性率35.6%和误诊率4.2%,操作复杂,费时费力。荧光PCR核酸检测技术具有较高的敏感性和特异性,在病因学诊断方面具有更高的参考价值。

       综上所述,本资料建立的RV荧光定量RT-P CR检测方法,具有高度的灵敏度和特异性,可对临床样本进行快速、大批量检测,为轮状病毒的检验、检疫及其病原生物学、分子流行病学研究提供了一种新的方法,使轮状病毒肠炎真正做到早期发现,早期诊断,早期治疗;并明确区分鉴别其他病毒性胃肠炎;明确排除细菌性、寄生虫性腹泻,避免滥用抗生素;对于防止轮状病毒暴发、流行,做好公共卫生工作具有重要意义。

 

参考文献

[1] J acob son RM.A n U pdat e on Ch ildhood an d A doles cent V accines[J]. M ayo Clin Proc,2009,84(5):457-479.

[2] 施蓓蕾,李世红,王天成.苏州地区婴幼儿A群轮状病毒腹泻的流行病学特征[J].吉林医学,2010,31(11):5769-5770.

[3] 黄英英,吴小华.轮状病毒的快速检测与临床应用[J].实验与检验医学,2010,28(5):482.

[4] 孙红,王斌,孙敏,等.免疫胶体金法与聚丙烯酰胺凝胶电泳检测儿童腹泻A组轮状病毒[J].检验医学,2006,21(6):679-681.

 

收稿日期:2011-04-08责任编辑:朱建洲

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